Jsou možné chyby PCR? Falešně negativní a falešně pozitivní výsledky PCR

Symptomy

Získat falešné výsledky v diagnostice PCR - falešně pozitivní i falešně negativní - mohou být ovlivněny různými okolnostmi.

Použití metody polymerázové řetězové reakce (PCR) vyžaduje nejpřísnější dodržování všech stupňů analýzy, počínaje analýzou analýzy lékaře k interpretaci výsledků analýzy. Jak informativní analýza PCR závisí na mnoha okolnostech.

  • Falešně pozitivní výsledek analýzy může vyplývat z vniknutí do materiálu (rozmazání nebo škrábání močové trubice) krve.
  • Podobné falešně pozitivní výsledky analýzy PCR se získají kvůli nepřítomnosti epiteliálních buněk v materiálu, ale obsah velkého množství zcela neinformačního hlenu.
  • Příjem falešných výsledků analýzy DNA je ovlivněn nevhodnou přepravou a skladováním získaných vzorků. DNA infekce v tomto případě může být zničena av důsledku toho - falešně negativní výsledek.
  • Poruchy sterility během diagnostiky PCR jsou dalším důvodem falešně pozitivní PCR. V pacientovi odebraném materiálu mohou cizí bakterie vstupovat z rukou lékaře, od oblečení, ze skla nebo kontaminovaných nástrojů do opakovaně použitelných nádob. Výsledkem je "neexistující" infekce.
  • Nevhodná činidla. Neobvyklé a zastaralé laboratoř, kde lékaři "zavírají oči" na neschopnost činidel, je dalším a závažným důvodem nespolehlivé diagnózy. Samozřejmě toto výrazně snižuje náklady na laboratorní diagnostiku, ale nemůže ovlivnit její výsledky.

Ve snaze vyhnout se těmto chybám, lékaři ze zdravotního střediska „Evromedprestizh“ velmi závažné přístupu k provádění laboratorní diagnostiky: Používejte pouze jednorázové materiály ve všech fázích analýzy, v souladu s nezbytnými opatřeními pro zachování kompletního sterility laboratorní a ordinaci. Máme pouze lékaře nejvyšší kategorie a zkušené asistenty laborantů, kteří pravidelně zlepšují svou kvalifikaci tak, aby nebyli léčeni neexistujícími nemocemi, ale měli spolehlivé výsledky.

Falešně pozitivní výsledek PCR

Naše výhody:

  • Levná obdržení lékaře z 900 rublů
  • Naléhavě Analýzy v den léčby od 20 minut do 1 dne
  • Zavřete 5 minut od stanice metra Varshavskaya a Chistye Prudy
  • Pohodlně každý den pracujeme od 9 do 21 denně (včetně svátků)
  • Anonymně!

Polymerázová řetězová reakce je možná jednou z nejcitlivějších a nejpřesnějších metod diagnostiky různých infekčních onemocnění, zejména těch, které jsou sexuálně přenosné. Stanovení i malého množství DNA částic bakterií, virů, hub, PCR je poněkud specifická metoda, která zřídka dává falešně pozitivní výsledky.

Falešně pozitivní výsledek znamená, že neexistuje žádná infekce a reakce je pozitivní.

Ale i při 98-99% přesností, PCR někdy jsou špatné odpovědi, které jsou téměř nikdy spojené s reakcí, ale více porušení v předběžné fázi.

Důvody falešně pozitivního výsledku analýzy PCR jsou:

  • Časová lhůta pro provedení kontrolních testů po léčbě sexuálních infekcí nebyla zachována. Faktem je, že většina infekcí je uvnitř buněk nebo fixována na povrchu jejich membrán. V průběhu celé léčby STI patogenu je zabit, ale částice ve svém genomu (DNA) zůstane po nějakou dobu v hostitelském organismu. Trvá asi 3 týdny, než se tyto buňky vymění za nové, které nekontaktovaly infekční agens, a pak se provede kontrola. Vezmeme-li analýzu před, vzhledem ke své vysoké citlivosti, PCR detekci DNA již mrtvé bakterie a indikuje přítomnost patogenu, který bude falešně pozitivní, protože infekce už zemřelo.
    Naši lékaři mají dostatečné znalosti v oblasti diagnostiky pohlavně přenosných pohlavních chorob a stárnutí, a proto jsou takové situace v klinické praxi soukromé vyloučeny.
  • DNA pohlavně přenosných infekcí vstupuje do zkumavky z rukou veterináře, z rukavic a urologických sond.
    Tento faktor je vyloučen, protože se používají pouze rukavice pro jednorázové použití, zkumavky a sondy.
  • Je extrémně vzácné mít falešně pozitivní výsledky, pokud existuje úzce příbuzný mikroorganismus ve škrábání. To znamená, že analyzátor dává najevo přítomnost patogenní bakterie, která způsobuje pohlavní nemoc, ale ve skutečnosti je to součást normální mikroflóry. Tento problém však již dlouho vyřešil zavedením modernějších a konkrétnějších zkušebních systémů.
  • DNA nebo kontaminace uzavření infekcí trubky v laboratorním stadiu výzkumu bylo i v případě, že je to možné, ale prakticky vyloučeno, správnou diagnostiku a výcvik organizace procesu.

V každém případě se diagnostika vždy provádí nejen na základě výsledků jedné analýzy. Konečná diagnóza pohlavně přenosné nemoci je kombinací stížností, klinického vyšetření a kombinace různých laboratorních a instrumentálních metod.

V případě, že urolog, gynekolog nebo venerolog objevují pochybnosti o správnosti výsledků PCR prokázaly nesoulad nebo stávající klinické a laboratorní diagnostické údaje mezi sebou navzájem, lékař vždy doporučit další vyšetření pomocí metody ELISA, NASBA, plodiny, s cílem vyjasnit situaci.

Na našich klinikách existují všechny dostupné metody moderní medicíny pro vyšetřování mužů a žen. Proto je vyloučeno zjištění falešných diagnóz virové infekce.

Doktor kliniky "soukromé praxe" dermatovenereolog, urolog Volokhov EA popisuje analýzu PCR pro infekci.

Lékařské centrum na Chistije Prudy a Varshavka

Recepce na našich klinikách denně od 9.00 do 21.00

V SAD a SWAD - metro Varshavskaya, Kakhovskaya, Sevastopol - st. Bolotnikovská dům 5 budova 2, tel. 8-499-317-29-72

Ve středu (CAO) - Metro Chistye Prudy, Turgeněv, Lubjanka - Krivokolenny lane dům 10 strana 9, tel. 8-495-980-13-16

Vaše dotazy

Otázka: Jak přesná je diagnostika PCR?

Jaká je přesnost diagnostiky PCR?


Přesnost PCR (polymerázová řetězová reakce) diagnostika u některých infekcí se pohybuje od 99 do 100 procent.
Je extrémně vzácné PCR dává falešně negativní výsledky av praxi nevyvolává falešně pozitivní výsledky. Falešně negativní výsledek je, když analýza ukazuje nepřítomnost patogenního mikroorganismu (zdroj infekce), pak když to ve skutečnosti je.
To se může stát, když:

  • Biologický materiál je nesprávně vybrán. Například, když infekce cytomegaloviru zkoumá moč (nikoli smeták z krku nebo krve) nebo diagnostika infekce centrální nervové soustavy (centrální nervový systém) namísto cerebrospinální tekutiny se používá krev.
  • Pravidla pro shromažďování biomateriálu nebyla dodržena. Pokud byla osoba podrobena antibiotické terapii během testů PCR, užíval uroseptikum a antivirotika. Podobně, falešně negativní testy mohou být, je-li před porodem mrtvice pacient nebo moč močil, měl sex před nebo užívání léků ve formě vaginálních čípků (svíčky).
  • Je zkoumán zdroj infekce, který v průběhu své životně důležité činnosti podléhá změnám. V srdci každého mikroorganismu je schopnost změnit. Některé viry mohou na úrovni DNA získat variabilitu (deoxyribonukleové kyseliny). Například virus chřipky má velkou schopnost "mutovat" a měnit své genetické informace. PCR tedy nemůže detekovat zdroj infekce, jelikož genom (agregátu genů) podléhají změnám.

Falešně pozitivní výsledek (analýza ukazuje přítomnost infekce, pokud není přítomna) není typická pro diagnostiku PCR a nachází se pouze v těch případech, kdy je infekce již "mrtvá", ale její mrtvé buňky cirkulují v těle. Neschopnost rozlišovat mezi "mrtvou" infekcí a aktivním (živé) je jednou z nevýhod metody PCR. V případě, že osoba už měla určitou infekci (onemocnění bylo léčeno a zabito antibakteriálními nebo antivirovými činidly), PCR analýza přinese pozitivní výsledek patogennímu mikroorganismu, i když je již "mrtvý".

Pokud je možný falešně pozitivní test na syfilis

Analýza definice syfilisu je nezbytná pro to, aby osoba přijala téměř všechny: zaměstnání, lékařské vyšetření, preventivní vyšetření, těhotenství. Provádění těchto studií je nezbytné - umožňují identifikaci onemocnění v počáteční fázi, kdy léčba bude mít nejvyšší účinnost.

Získaný pozitivní výsledek často přivádí člověka na neúspěch, a to zejména proto, že neexistují žádné důvody. Detekce falešně pozitivních syfilisů je poměrně častým výskytem, ​​a proto se nemusíte panikati předčasně. Podle informací z různých zdrojů může až 30% primárních studií přinést špatný výsledek. Existuje mnoho důvodů pro tento jev: změna stavu těla, somatické nemoci. Abychom lépe pochopili, proč se objevují, je třeba pečlivěji porozumět problematice výzkumu.

Typy testů na syfilis

Metody klinického výzkumu se každým rokem rychle zlepšují. S vývojem nových metod diagnózy je falešně pozitivní reakce na syfilis méně a méně častá. V případě potřeby může diagnóza zahrnovat několik různých metod - což vám umožní získat nejspolehlivější výsledek.

Non-treponemální metody výzkumu

Tyto techniky jsou zaměřeny na identifikaci proteinů, které jsou tvořeny v důsledku působení bledých spirochetů. Jsou zaměřeny na stanovení "stop" patogenu. Tyto metody mají poměrně vysokou procentní chybu (až 10%). Takové techniky jsou nešpecifické, ale umožňují titr protilátek stanovit stupeň infekce.

Wassermannovy reakce RW

Nejběžnější analýzou, která se provádí k identifikaci bledého treponému, je sérologické vyšetření krve. Reakce společnosti Wasserman nám umožňuje určit přítomnost onemocnění během několika minut. Proto se tato technika nejčastěji používá v laboratořích - nevyžaduje mnoho času a má relativně nízké náklady.

Pro analýzu se používá míchová tekutina nebo krev. Vzorkovací materiál lze odebrat z prstu (pokud je analyzován pouze jeden) nebo z žíly (pokud je zapotřebí více studií). Výsledkem analýzy může být nejen falešně pozitivní, ale také falešně negativní. Je to možné za následujících okolností:

  • v počáteční fázi infekce, kdy je množství treponemu v těle stále nízké;
  • chronické onemocnění ve stádiu remisie, kdy počet protilátek klesá.

Dávejte pozor! Falešně negativní výsledek vzniká velmi zřídka, a proto je-li k dispozici alespoň jeden ze čtyř, je nutné provést další vyšetření.

Mikroretekce recyklace (MR)

Tato metoda zkoumání je založena na reakci antigen-protilátka. To vyžaduje malé množství materiálu k provedení. Je zaměřen na detekci antilipidních protilátek, které jsou produkovány v procesu destrukce buněk treponemem. Pro studium se používá jak krev pacienta, tak cerebrospinální tekutina.

Protože destrukce buněk může nastat nejen při syfilisu, analýza se používá jako screening a není potvrzující. Existují dva analogy této techniky:

  • Mikroskopický test (VDRL). Pro provedení analýzy se používá inaktivované krevní sérum. Pokud existuje podezření na poškození nervového systému syfilisem, jako testovací materiál se použije míchová tekutina.
  • Makroskopický test (RPR). Je považován za metodu expresní diagnostiky. Využívá se vizuální výpočet plazmových reakčních složek.

Tato reakce, pokud není pozorována nezbytná sterilita, může vykazovat falešně pozitivní výsledek. Vzhled takové analýzy je také možný při nešpecifickém poškození tkáně, což vede k destrukci lipidů. Pokud je pozitivní výsledek, doporučuje se prověřit povinný test treponem.

Treponemální metody výzkumu

Tato kategorie analýz poskytuje nejpřesnější údaje a jsou málokdy chybně pozitivní výsledky. Studie jsou zaměřeny na identifikaci specifických proteinů, které organismus uvolňuje v reakci na infekci. Tyto metody mají vyšší náklady, a proto se používají jako potvrzující, nikoliv kvalifikační.

Specifické protilátky začínají být tvořeny tělem jen několik týdnů po infekci treponemem. Mohou dlouhodobě trvat na léčbě onemocnění. Proto mohou specifické testy po dlouhé době po remise vykazovat pozitivní výsledky.

Dávejte pozor! U pozitivních RW a negativních specifických je provedena opakovaná studie po několika týdnech.

Imunoenzymová analýza (ELISA, EIA)

Vychází z vyhodnocení hladiny imunoglobulinů IgA, IgB a IgM. První dva typy proteinů se produkují v těle od 2 týdnů infekce a IgM - měsíc po infekci.

Interpretace analýzy se provádí na základě poměru přítomnosti imunoglobulinů:

  • Bylo zjištěno pouze IgA - po infekci uplynulo více než 14 dní;
  • Infekce IgA a IgB byly detekovány před 14 až 28 dny;
  • nalezly všechny tři typy - syfilis v těle více než 28 dní;
  • Bylo zjištěno pouze IgM - pozdní syfilis.

Přítomnost IgM může být známkou již vytvrzeného syfilisu - syntéza imunoglobulinů IgM může pokračovat několik měsíců po remisi.

Reakce imunofluorescence (RIF, FTA)

Používá se k potvrzení infekce v nejranějším stádiu. Pro studii je krve převzata z prstu nebo žíly. Výsledek je podobný analýze RW, kde je indikováno mínus nebo od 1 do 4 plusů. Pokud existuje alespoň jeden plus, může být přidělena další studie.

Je extrémně vzácné najít falešně pozitivní výsledky při výkonu RIF - mohou být u těhotných žen, stejně jako u pacientů s onemocněním pojivových tkání.

Reakce pasivní aglutinace (TPHA, TPHA)

Titr protilátek umožňuje stanovit přítomnost syfilisu a jeho stupeň. Spolehlivé údaje, které tato technika poskytuje již od 28 dnů po infekci. Pro hodnocení je použita krev z prstu nebo žíly. Zvýšení počtu protilátek znamená pozdější fázi onemocnění.

Nejpřesnější metody výzkumu

Analýzy této skupiny jsou vysoce citlivé, a proto jsou chyby ve výsledcích velmi nízké. Vyznačují se vyššími náklady v porovnání s jinými metodami a sofistikovanější technikou implementace.

Polymerázová řetězová reakce (PCR)

Analýza PCR je považována za jednu z nejpřesnějších. Zaměřuje se na určení oblastí patogenní DNA v lidském těle. Metoda vyžaduje speciální vybavení a činidla, a proto se používá ve vzácných případech.

Imunoblotting

Kombinovaná metoda šetření. Jeho cílem je stanovení imunoglobulinů v krevním séru pacienta. Při analýze se kontroluje přítomnost komplexu protilátek, podle něhož je stanovena diagnóza. Při této technice se používá elektroforéza, se kterou jsou imunodeterminanty odděleny, a ELISA test, který vykazuje oddělené body.

Reakce imobilizace bledých treponemů (RIBT)

Velmi specifická analýza, která určuje reakci krevního séra na bledou treponemii. Je široce používán po celém světě, protože má vysokou pravděpodobnost přesného výsledku. Zvláštní protilátky (imunomobiliziny) u pacienta se syfilisem jsou schopné imobilizovat treponem. V krvi zdravé osoby neexistují takové protilátky. Je to na přítomnosti / nepřítomnosti této schopnosti založené na metodice výzkumu.

RIBT se používá k identifikaci těch odrůd syfilisu, při kterých vede Wassermanova reakce k negativním výsledkům - porážce nervového systému, vnitřních orgánů, latentní formy onemocnění. Falešně pozitivní výsledek v zemích SNS je velmi vzácný. Příčinou jeho výskytu může být sarkoidóza, malomocenství.

Příčiny falešně pozitivních výsledků

Wassermanova reakce může určit "akutní" a "chronické" falešně pozitivní výsledky. Jeho závažnost závisí na povaze změn v lidském stavu. Stupeň zhoršení RW lze prokázat v takových případech:

  • infekčních onemocnění ve stadiu exacerbace;
  • traumatické poranění;
  • infarkt myokardu;
  • zavedení jakékoliv vakcíny několik dní před testem;
  • otrava jídlem.

Tyto stavy jsou charakterizovány zvýšenou prací imunitního systému, což vede ke zvýšené tvorbě protilátek. Omyly se v reakci mylně rozpoznávají jako protilátky proti treponému, a proto vzniká pozitivní výsledek.

Za přítomnosti patologických stavů chronické povahy způsobuje imunitní systém velké množství nespecifických protilátek, které mohou vyvolat reakci. V RW může tento stav vykazovat falešně pozitivní výsledek. Proto stojí za to upozornit lékaře na následující nemoci:

  • chronická patologie pojivové tkáně;
  • tuberkulóza;
  • chronické onemocnění virové etiologie: HIV, hepatitida B, C, D;
  • chronické onemocnění jater;
  • autoimunitní patologie.

S věkem v těle pacienta se redoxní reakce zpomalují. Tkáně stárnutí mohou také vykazovat falešně pozitivní výsledek, a proto jsou starším pacientům přiřazeny přesnější metody výzkumu.

Dávejte pozor! Při pozitivní reakci Wasserman se provádí další studie, která umožňuje získat přesnější obraz.

Znovu zkontrolujte

Opakovaný test na syfilis se provádí s pochybnými výsledky screeningové studie. Je určen jedním nebo dvěma křížky - tato analýza vyžaduje další ověření. Studie může poskytnout falešně pozitivní výsledky v několika případech:

  • Počáteční fáze onemocnění. Před vznikem pevné chancre je množství imunoglobulinů v těle dostatečně nízké.
  • Pozdní fáze onemocnění. Od infekce uplynulo více než 2 roky a titr protilátek postupně začal klesat.

Opakovaná analýza, která se provádí po 2-3 týdnech, přesně ukazuje, zda existuje onemocnění. Pokud je kladný výsledek podruhé, použijí se další techniky pro vyjasnění.

Těhotenské testy

Jedním z nejočekávanějších může být pozitivní výsledek testu pro syfilis u těhotných žen, zvláště pokud žena neměnila partnera. Tato situace často děsí budoucí matky, protože treponema může negativně ovlivnit intrauterinní vývoj dítěte.

Screening pro těhotenství se provádí několikrát:

  • při registraci do 12 týdnů;
  • počátek třetího trimestru po 30 týdnech;
  • před porodem.

Toto je množství výzkumu, které je považováno za minimální. Falešně pozitivní analýza pro syfilis se může projevit díky restrukturalizaci těla, ke které dochází během těhotenství. Když žena nese dítě, její imunitní systém produkuje velké množství protilátek - evoluční zařízení na ochranu dítěte v prvním roce života.

Během těhotenství je předepsána další refineční analýza, která je charakterizována větší přesností. Pokud kontrolní studie ukazuje přítomnost agens v těle, léčba je povinná. Účinek léčby na rostoucí organismus je podstatně menší než možný úbytek treponému.

Jak se připravit na analýzu?

Jedním ze způsobů, jak zabránit špatnému výsledku, je příprava na doručení testů. Vzhledem k nesprávné přípravě mohou nastat reakce, které jsou doprovázeny produkcí nešpecifických protilátek, což vede k vzniku nesprávného výsledku.

  • Analýza se musí provést na prázdný žaludek. Můžete použít pouze čistou vodu.
  • Den před odběrem krve je nutné zcela odstranit alkohol - vytváří další zátěž játry, což může vést k pozitivnímu výsledku.
  • V předvečer se doporučuje odmítnout jíst tučné a smažené potraviny, kořeněné pokrmy a velké množství koření.
  • Nejméně 60 minut před analýzou se doporučuje upustit od kouření.
  • Než začnete krvácet z žíly, potřebujete odpočívat 10-15 minut v přijímacím oddělení.
  • Ženám se nedoporučuje darovat krev během menstruace.
  • Není možné provést analýzu po rentgenovém vyšetření, fyzioterapeutických postupech.
  • Při exacerbaci infekčních onemocnění je zakázáno darovat krev za syfilis.

Dávejte pozor! Pokud pacient užívá nějaké léky, měl by před zahájením vyšetření konzultovat lékaře, může mezi léčbou a analýzou trvat několik dní.

Co mám dělat, pokud mám syfilis?

Nedělejte si starosti o získání primárního screeningu s pozitivními výsledky. Falešný syfilis lze snadno stanovit opakovaným vyšetřením. Pokud byla diagnóza potvrzena, je třeba přijmout opatření:

  • vyšetření sexuálního partnera v dermatovenerologii;
  • vyšetření blízkých příbuzných;
  • provádění preventivní léčby, prevence infekce příbuznými;
  • zapsání pracovní neschopnosti na dobu léčby - formulář o pracovní neschopnosti neobsahuje informace o diagnóze, což zaručuje důvěrnost;
  • na konci kurzu je vydán zvláštní certifikát - musíte si je nechat s vámi vyhnout, abyste se v následujících měsících vyhnuli otázkám o falešně pozitivních výsledcích.

Pozitivní výsledek pro syfilis není vždy spolehlivý. Proto se nebojte a doporučujeme počkat na další výzkum. Správná léčba, která byla zahájena včas, zaručuje rychlé uzdravení s minimálním zbytkovým účinkem.

Jsou možné chyby PCR? Falešně negativní a falešně pozitivní výsledky PCR

Sdílet nové informace v:

Chcete-li přijmout falešné výsledky v diagnostice PCR - Jak falešně pozitivní, tak falešně negativní - mohou ovlivnit různé okolnosti.

Použití metody polymerázové řetězové reakce (PCR) vyžaduje nejpřísnější dodržování všech etapách analýzy, počínaje analýzou vzorkůdoktor před interpretováním výsledků analýzy. Jak informativní analýza PCR závisí na mnoha okolnostech.

  • Falešně pozitivní výsledek analýzy může být důsledkem vstupu do materiálu (rozmazání nebo škrábání močové trubice) krve.
  • Podobné falešně pozitivní výsledky analýzy PCR se získají kvůli nepřítomnosti epiteliálních buněk v materiálu, ale obsah velkého množství zcela neinformačního hlenu.
  • Příjem falešných výsledků analýzy DNA je ovlivněn nevhodnou přepravou a skladováním získaných vzorků. DNA infekce v tomto případě může být zničena av důsledku toho - falešně negativní výsledek.
  • Poruchy sterility během diagnostiky PCR jsou dalším důvodem falešně pozitivní PCR. V pacientovi odebraném materiálu mohou cizí bakterie vstupovat z rukou lékaře, od oblečení, ze skla nebo kontaminovaných nástrojů do opakovaně použitelných nádob. Výsledkem je "neexistující" infekce.
  • Nevhodná činidla. Neobvyklé a zastaralé laboratoř, kde lékaři "zavírají oči" na neschopnost činidel, je dalším a závažným důvodem nespolehlivé diagnózy. Samozřejmě, je to velmi levné laboratorní diagnostika, ale nemůže ovlivnit jeho výsledky.

Sdílejte nové informace s přáteli a známými v:

Co je lepší a efektivnější v laboratorní diagnostice - analýza PCR nebo ELISA?

PCR a ELISA jsou dvě diagnostické metody, které získaly uznání mezi lékaři. Obě studie molekulární biochemie jsou přesné a spolehlivé. Existuje rozdíl mezi PCR nebo ELISA, co je lepší a pravdivější o patologii? Abychom zodpověděli otázku, je třeba pochopit podstatu technik, identifikovat podobnosti a rozdíly v diagnostických metodách.

Co je PCR?

PCR je vysoce citlivá polymerázová řetězová reakce, která v těle detekuje patogen (viry, bakterie, chlamydia). Tato technika je založena na stanovení specifické DNA struktury přítomné v infekci. PCR se provádí, pokud existuje podezření na latentní chronický průběh infekčního procesu v organismu, který je v latentní formě. Vlastnosti a výhody PCR zahrnují:

  • vysoká 100% citlivost vůči patogenům jakéhokoliv typu s přítomností unikátních fragmentů nukleových kyselin;
  • rychlost výsledku;
  • možnost stanovení počtu jednoho typu patogenu;
  • současná diagnóza několika patogenů.

Laboratorní asistenti snadno určují strukturu DNA jediného vyvolávajícího činidla pomocí polymerázové řetězové reakce, která umožňuje sledovat a hodnotit výsledky léčby po předepisování léků. PCR, jako nová výzkumná metoda, je nezbytná pro diagnostiku takových onemocnění:

  • tuberkulóza;
  • záškrtu;
  • salmonelóza;
  • HIV;
  • AIDS;
  • nezávislý stupeň hepatitidy C;
  • bakterióza.

Co je to EIA?

ELISA je imunitní metoda vyšetřování a přesná analýza k identifikaci patologických stavů v těle způsobených infekčními činidly. Studie je určena, pokud máte podezření:

  • syfilis;
  • hepatitida B, C;
  • chlamydia;
  • toxoplazmóza;
  • cytomegalovirus;
  • virový herpes;
  • ureaplasmóza;
  • samičí mykoplasmóza.

Immunofer vám umožní identifikovat onkologii v rané fázi. Test ELISA je předepsán k detekci hladiny hormonů v krvi, k diagnostice onemocnění endokrinního systému detekcí markerů rakoviny. Imunoenzymatické vyšetření má mnoho výhod:

  • Jednoduchost a rychlost provádění;
  • vysokou citlivost pro reakce antigen-protilátka i na pozadí nezanedbatelné koncentrace patogenu v těle;
  • Analýza Vysoký stupeň specifičnosti, který umožňuje rychle rozpoznat a nainstalovat komplexu antigen-protilátka, se použitý enzym značení schopen přesně stanovit interakci signálu mezi těmito dvěma, rozpoznat imunoglobuliny (protilátky IgM, IgG) v krvi.

V případě infekce organismu v počáteční fázi dominuje imunoglobulinové třídy M. Podle progrese infekce spojených protilátek třídy A. V případě, že onemocnění v pokročilém stadiu přepínačů, spustí generování třída imunoglobulinu imunoglobulinu G. Enzymová reakce odhalí stupeň závažnosti onemocnění a stupeň vývoje onemocnění.

Od IFA se liší od PTSR?

Testy PCR a imunofermentální (ELISA) jsou stejně potřebné pro diagnostické účely. Obě studie mají klady i zápory, podobnosti a rozdíly.

  1. EIA. Hlavním směrem je detekce produktů životně důležité aktivity markerových proteinů nebo vytvoření kontaktů mezi patogenem a imunitním systémem. Odmítnutí nebo potvrzení infekce v orgánech. Rozdíl mezi ELISA a PCR je vhodnost jakéhokoliv biomateriálu pro analýzu: vzorek tkáně, sliny, moč, krev.
  2. PCR umožňuje identifikovat specifický patogen patřící do skupiny hub, virů, bakterií. Polimerazny metoda diagnostiky detekuje patogenní organismus v materiálu: kapalina, tkáň, orgán. Chcete-li získat rozsáhlý obraz patologických procesů vyskytujících se v těle, lékaři okamžitě přidělí komplexu 2 typy analýz. To je důležité pro identifikaci ZPPPA (patologie přenášené během pohlavního styku).

Aby bylo možné přesně nastavit infekční onemocnění, sexuálně přenosné, a hladiny protilátek v krvi, první PCR byla prováděna, protože výsledky studie ELISA nerozumné na základnu bez získání primárních dat.

Při zjišťování protilátek v těle nelze jednoznačně stanovit jeden IFA: zda se v těle objevuje patologický proces nebo ne. Pravděpodobně byly kontakty s patogenem, ale daleko v minulosti, a analýza může dát falešný výsledek.

Není možné vyvodit jednoznačné závěry o PCR nebo ELISA a co je ve skutečnosti spolehlivější. Test ELISA je účinnou metodou diagnostiky, ale pravděpodobnost vývoje onemocnění může být potvrzena pouze PCR, takže je rozumné provádět obě studie dohromady. PCR je přesnější metoda vyšetřování, ale ve vzorku tkáňového materiálu a na samostatné části těla. Přes přesnost chybové techniky se často stává, protože infekční proces se může rychle šířit po celém těle.

Rozdíl mezi výzkumem

Postupujte podle postupu, například: chlamydií přes cervikální kanál, je to obtížné. Infekce nemusí být přítomna ve vaječnících a vajíčcích, pokud test ELISA dává pozitivní odpověď a test PCR je negativní. Stává se to naopak. Chcete-li získat 100% výsledku, je lepší provést oba testy pro PCR a ELISA.

Často se, že PCR a ELISA výsledky analýzy neshodují, které se děje v dlouhé chronické infekce nebo závislost proudící organismu jeho vlivu. V tomto případě je ELISA negativní a PCR je pozitivní. Pokud se stěr trochu choroboplodné zárodky, ale vytvořené titry protilátek a dlouhá doba jsou uloženy v krvi i po průběhu léčby, ELISA pozitivní a PCR - negativní.

Metody často poskytují falešně pozitivní nespolehlivé odpovědi, například když: ELISA pozitivní, PCR pozitivní. Příznaky pacienta jsou vzaty v úvahu, ať už byly léčeny pro infekce. Ve skutečnosti se stane, že PTSR je negativní a IFA je negativní.

Různé klinické případy vyžadují individuální přístup. Proto, jaká analýza je vhodnější pro provedení a to je přesnější: PTSR nebo IFA - rozhodnutí rozhoduje ošetřující lékař.

Zkontrolujte skryté sexuální infekce a proveďte testy nejlépe s partnerem. Koneckonců se stává, že člověk jednoznačně vyjádřil průběh zánětlivého procesu, zatímco druhý nemá ani podezření, že negativně ovlivňuje sexuální život a způsobuje nedůvěru. Je vždy lepší konzultovat s lékařem a být léčeni oběma partnery, aby se zvýšila účinnost léčby a zkrátila doba léčby.

Například: ureaplasmóza a mykoplazmóza mohou být dobré výsledky léčby zánětlivých procesů v pánvi dosaženy pouze v případě společného léčení.

Vzhledem k zvláštnostem lze konstatovat, že diagnostika PCR a test ELISA mají rozdíl, ale obě metody mohou spolehlivě určit přítomnost patologických stavů. Pouze odborníci však dokáží určit rozdíl mezi metodami, zvolit skutečné a správné metody diagnostiky, přesněji dát přepsání výsledků analýzy.

Více informací o metodě PCR můžete získat z videa:

Typické chyby v diagnostice polymerázové řetězové reakce

Laboratorní diagnostika na bázi polymerázové řetězové reakce (PCR), díky své rychlosti a vysoké citlivosti, získává stále více a více vývoj. Nicméně i přes jednoduchost a pohodlí metody existuje řada podmínek, jejichž selhání může vést k nespolehlivému nebo nesprávnému výsledku.

Jednoduché na první pohled má metoda řadu "úskalí", které se jedna nebo druhá musí zabývat téměř všemi laboratorními specialisty. Různé chyby mohou způsobit jak nedostatek zkušeností s používáním této techniky, tak stereotypy myšlení osob, které dříve pracovaly v biochemických nebo bakteriologických laboratořích, kde existují další požadavky na práci. V důsledku těchto chyb lze získat falešně pozitivní, falešně negativní nebo nespolehlivé výsledky testů.

Všechny chyby povolené v laboratorní praxi lze rozdělit do tří tříd:

  • chyby preanalytické etapy;
  • chyby v analytické fázi;
  • chyby postanaliticheskogo fázi.

Chyby preanalytické fáze diagnostiky PCR

Užívání biologického materiálu.

Chlamydia trachomatis může infikovat slizniční epitel urogenitálního traktu, spojivkového epitelu oka a synoviální dutině. Z tohoto důvodu, v případě podezření urogenitálního chlamydióze materiálu pro studie by měla sloužit jako seškrabávání urogenitálního traktu, onemocnění oka novorozence - zaškrabávání spojivky, s chlamydiovou artritidy - tečkované synoviální tekutiny.

Mycobaktární tuberkulóza může ovlivnit téměř jakýkoli orgán a tkáň lidského těla, tj. Materiál pro výzkum by neměl být spalován stejným způsobem v různých formách patologického procesu.

Pokud tedy dítě má chlamydiózu oka a vzorek odebraný z urogenitálního traktu je pro studium přijat a pro studium je prohlášen za tuberkulózu, negativní výsledek nevylučuje fakt infekce pacienta.

Druhou chybou v předanalytické fázi je nesprávné převzetí materiálu pro studium.

Obecnými požadavky na biologický materiál jsou maximální koncentrace mikroorganismů ve vzorku a také nepřítomnost nežádoucích nečistot, které inhibují PCR.

Například Chlamydia trachomatis jsou povinné intracelulární parazity, proto musí zkoumaný materiál obsahovat velké množství epiteliálních buněk [4]. To znamená, že při pořizování materiálu k identifikaci těchto mikroorganismů je nutné provést škrábání a ne rozmazání, protože v nátěru Chlamydia trachomatis nebudou detekovány, i když jsou v těle ve významném množství.

Při užívání materiálu z urogenitálního traktu je nutné vyhnout se inhibičním nečistotám, jako je hlen, krve nebo hnis. Za tímto účelem se škrábance odeberou nejdříve dvě hodiny po močení, ženy berou v úvahu dny cyklu [1]. Nadbytečný hlen nebo hnis musí být odstraněny sterilním bavlněným tamponem těsně před podáním biomateriálu. Vezměte materiál s výhodou pomocí speciálních plastových sond, což snižuje pravděpodobnost výskytu krev ve vzorku, kromě toho, na rozdíl od vaty, neabsorbují transportní médium a testovací materiál. [1]

Léčba biologického materiálu

Správné urogenitální přičemž stěry - postup bolestivé pro muže i děti, takže studie může použít první část ranní moči obsahuje maximální počet epiteliálních [1] V následujícím textu, protože je nutné získat buněčné pelety moči. Avšak sraženina obsahuje velké množství solí a močoviny, které při použití fluorescenčních detekčních technologií denaturují sondy, což může vést k falešně pozitivním výsledkům. Proto musí být buněčný sediment moči nezbytně promyta fyziologickým solným roztokem [4]

Další chybou předanalytické fáze je nesprávné zacházení s krví. Aby se zabránilo srážení krve během podávání, je nutné používat antikoagulancia. V mnoha laboratořích se heparin používá jako antikoagulant. Nicméně, heparin dostatečně silně inhibuje PCR, a to bez ohledu na testovacím systému a metody přípravy vzorku, všechny výsledky pro vzorek, která jej obsahuje, je neplatné, pokud některý z interní kontroly PCR nebo negativní, bez ohledu na skutečné situace, je-li vnitřní kontroly ne [3]

Skladování biologického materiálu

Chyby analytické fáze diagnostiky PCR

Chyby v provozu

Chyby analytického stupně jsou obvykle spojeny s nepozorným čtením instrukcí připojených k soupravě pro provádění analýzy PCR.

Jednou z těchto chyb je nesprávná volba systému přípravy vzorku. Méně nebezpečné použití rychlých metod pro komplexní biomateriálů - jako je například krevní plazma, protože v tomto případě s největší pravděpodobností dát nesprávné výsledky v důsledku zbývající v inhibitory PCR vzorek, který, podle pořadí, bude nutit odborné CDL opakovat experiment a zjistit důvod selhání. Mnohem nebezpečnější, je-li v důsledku nesprávně vybrán zkušební systém v procesu přípravy vzorku se ztrácí část nebo všechny DNA nebo RNA původce onemocnění - v tomto případě, je zde riziko falešně negativní výsledek.

Druhou chybou jsou nesprávně připravené testovací zkumavky na pozadí pro testovací systémy s fluorescenční detekcí v koncovém bodě. Nejčastěji je to kvůli tomu, že zaměstnanec laboratoře nezapomene změnit je, když se objeví nová řada činidel nebo z ekonomických důvodů tak neučiní. Je možné, že stejné složky reakční směsi budou mít sotva jinou úroveň fluorescence, nicméně v různých sériích činidel se koncentrace složek mohou lišit a pravděpodobnost různých úrovní fluorescence je vysoká. Chyba, kterou lze v některých případech přehlédnout, může vést k velkému počtu nespolehlivých výsledků.

Další chybou spojenou s nesprávnou přípravou pozadí trubek je přidání polymerázy do nich. To se může stát buď náhodně, nebo proto, že laboratorní technik zcela nerozumí, proč není nutné přidávat polymerázu. Mohou existovat dva varianty vývoje událostí: pokud testovací systém nezahrnuje vnitřní kontrolu nebo pokud nebyl extrahovaný pufr použit jako negativní kontrolní vzorek a pokud testovací systém zahrnuje vnitřní kontrolu, která je pod parafinem a / nebo negativní vzorek prochází stupněm výběr. V prvním případě může přidání polymerázy významně neovlivnit výsledek, avšak v tomto případě existuje riziko kontaminace, jak pozitivní, tak vnitřní. Ve druhém případě jsou všechny záporné hodnoty nespolehlivé. Není problém detekovat chybu, protože normalizační hodnoty jsou velmi vysoké, blízké 103 a hodnoty fluorescence v některých zkumavech jsou mnohem nižší než 1.

Kontaminace

Problém kontaminace vzniká v případě, že laboratoř není řádně uspořádána nebo jsou pozitivní vzorky nepřesné. Takže při použití gelové elektroforézy jako metody detekce musí prostor pro její chování mít nutně samostatný vstupní a ventilační systém. V opačném případě je pravděpodobnost, že amplicon z otevíracích trubek vstoupí do jiných místností, velmi vysoká. To může vést k tomu, že časem bude stále více a více vzorků testovaných na časté infekce pozitivní. V prvních fázích tohoto znečištění zůstává negativní kontrola čistá, protože výskyt falešně pozitivních výsledků má statistický charakter.

V případě fluorescenční detekce se trubice neotvírají a teoreticky se pravděpodobnost kontaminace blíží nule, ale není vyloučena možnost jejího otevření. Proto je lepší, pokud bude zesílení a detekce prováděno v samostatné místnosti, pak v případě nouzové situace bude jedna místnost kontaminována.

Další chyba, která vede ke kontaminaci vzorků, je spojena s nepřesným zacházením jak s klinickými vzorky, tak s pozitivními kontrolními vzorky a standardy. Někteří laboratorní odborníci používají jeden tip pro uložení velkého počtu trubiček stejné látky. To je normální, pokud jsou trubky prázdné nebo jejich obsah je stejný (příprava zesilovacích zkumavek). Avšak pokud je v trubici například vzorek během přípravy vzorku, pak i zavedení stejného roztoku do různých zkumavek zvyšuje riziko přenosu DNA mezi zkumavky - tzv. Křížová kontaminace. Aby se zabránilo křížové kontaminaci, doporučuje se také použít špičky s filtry pro vkládání vzorků potenciálně obsahujících DNA.

Navíc, s neohrabanou prací existuje riziko zavedení inhibitorů do vzorku (například mastek z rukavic).

Chyby při interpretaci výsledku

Když mluvíme o chybách při interpretaci výsledků, má smysl uvažovat o různých metodách detekce.

Při zjišťování pomocí gelové elektroforézy existuje riziko, že se nespecifické fragmenty pro specifické, jestliže jsou blízké, a neexistuje způsob, jak je jasně a jednoznačně srovnávat s pozitivní kontrolou a v ideálním případě s ukazatelem délky. Vzhledem k tomu, že vzorky jsou často aplikovány na gel s jediným hrotem, hrozí nebezpečí kontaminace již ve fázi detekce, pokud je hrot špatně promyt, nebo pokud jedna ze vzorků má velmi vysokou koncentraci DNA. Tento druh kontaminace lze snadno sledovat, pokud je páska pozorována v vědomě negativním vzorku, ale je nerozlišitelná od kontaminace v laboratoři a vyžaduje opakovanou kontrolu všech vzorků.

Jeden výklad chyby spojené s použitím způsobu fluorescenční detekce koncového bodu je nepozornost na hodnoty normalizaci pozadí zkumavky a hodnot fluorescence v negativních vzorků. Tak, když nesprávně uloženy v pozadí sondy trubky může zhroutit a hodnota normalizace významně zvýšila po dobu od několika hodin do několika dnů, s hodnotami fluorescence vzorků jsou ve větší nebo menší míře podceňovat. Hlavním kritériem pro spolehlivost výsledků získaných v tomto případě mohou být negativní vzorky. Při absenci nesrovnalostí mezi pozadím a zesilovacími zkumavky mají negativní vzorky hodnoty fluorescence v blízkosti jednoty nebo ve vzácných případech mírně vyšší. Pokud jsou hodnoty fluorescence v jedné nebo více vzorcích nebo negativních kontrolách výrazně nižší než jedna, je vysoce pravděpodobné, že trubky na pozadí neodpovídají této studii, v takovém případě je nutné je změnit.

Navíc k výše uvedenému příkladu se může stát, že fluorescence pozadí vzrůstá v zesilovacích zkumavkách, zatímco v testovacích zkumavkách zůstává fluorescence nezměněna. Tato situace může nastat, když jsou zesilovací trubky skladovány při pokojové teplotě. V tomto případě se zvýší obsah pozitivních výsledků s nízkými hodnotami fluorescence. Výsledky tedy učit, například při znečištění v laboratoři, ale v tomto případě jsou všechny hodnoty nízké fluorescence jsou přibližně stejné, v tomto případě kontaminace je poměrně vzácné, protože je nepravděpodobné, že stejné množství cizího materiálu budou mít všechny negativní trubky. Takový snadno vyhnout, pokud změníte trubky na pozadí jednou za měsíc a půl, v tomto případě zpravidla nemá čas se jeví jako poměrně velký rozdíl mezi ready-made pozadí a amplifikačních zkumavkách.

Chyby po analytické fázi diagnostiky PCR

Chyby v závěrečné fázi po analýze souvisejí s nesprávnou interpretací výsledků PCR analýzy lékaře v důsledku nesprávných představ o infekčním agens nebo možnostech této metody.

Například, kontrolovaná studie pro chlamydie na 1 týden po ukončení kurzu antibiotik poskytnout pozitivní výsledek. Lékař dospěje k závěru, že terapie je neúčinná. Nicméně konečný výstup může být provedeno dříve než 4-6 týdnů po epiteliální vrstva se nahrazuje, který parazituje mikroorganismu [1] Včasná diagnóza může zobrazit nesprávný výsledek, protože epitelové buňky přetrvávají mrtvé mikroorganismy.

V případě zpětného výzkumu možné „imunologické stopa“ - zbytkové protilátek, které se u některých lidí mohou přetrvávat po mnoho měsíců nebo dokonce let po zotavení, nebo pomocí PCR se nepovažuje za druhově specifické testovací systémy.

Co je PCR? Falešně pozitivní výsledek PCR

Diagnóza založená na polymerázové řetězové reakci se objevila před třiceti lety díky výzkumu amerického vědce Carrie Mullesové. Metoda se rozšířila a stala se průlomem v mikrobiologickém výzkumu.

Obecně řečeno, technika navrhovaná společností Mulles umožňuje klonování genů. Podstata mikrobiologického diagnostického nástroje zjištěného v důsledku výzkumu je následující. Mezi obrovským množstvím informací o genu bylo možné nalézt konkrétní místo s požadovaným kódem DNA. Tento fragment, při použití přirozené schopnosti DNA replikovat (množit), je pak opakovaně klonován.

Celý proces probíhá ve zkumavce. Reprodukce vzorku se provádí za použití enzymu polymerázy. Dva vzorky odebrané pro konkrétní část DNA, kombinují řešení při hledání komplementárních oblastí a připojují se k nim. Vytvoří se počáteční oblast, která se potom zkopíruje. To je to, co je PCR.

Přirozená reprodukce DNA se objevuje neustále v jakémkoli živém organismu. Relativně mladá diagnostická metoda, popsaná výše, vám umožňuje řídit tento proces. A účinek není na celou molekulu, ale pouze na určité části nukleové kyseliny (DNA). Reakce se opakuje, čímž dochází ke zvýšení fragmentovaných fragmentů DNA v geometrické progresi, takže reakce se nazývá řetězová reakce.

Aby proces řetězové reakce mohl být zahájen, musí být v analyzované biosféře přítomen cizí prvek, jinak nebude žádná reakce.

Aplikace

Diagnostické studie založené na ČLR se úspěšně používají, především v lékařství. Tato metoda umožňuje identifikovat buňky infikované virem a genetické choroby. Pulmonologové mají možnost identifikovat virové typy pneumonie a tuberkulózy. V praxi gynekologie a urologie je možné provádět studie zaměřené na identifikaci onemocnění, které by mohly být již dříve mnoho let pozorovány u pacientů, jako je ureaplasmóza a chlamydie. V současné době je metoda polymerázové řetězové reakce používána k diagnostice infekčních onemocnění prakticky ve všech oblastech medicíny.

Nezbytné pro obdobné výzkumné a forenzní vědce. Podle analýzy DNA, která je převzata z biologického materiálu, který zůstává na místě činu, mohou odborníci určit, zda se jedná o určité osoby. Případy, kdy pachatel nezanechává stopy, protože vymazali otisky prstů, se již dávno stali historií.

Dokonce aniž bychom se setkali s pojetím PCR, co neví, mnozí byli schopni zažít výhody této metody diagnostiky. Takové studie dokáží identifikovat jednotlivé buněčné patogeny, což je mimo výkon jiných imunologických a bakteriálních diagnostických metod. Reakce trvá jen několik hodin, což vám umožní vytvořit výsledek během pracovního dne.

Chyby ve výsledcích výzkumu

Během denní práce laboratoře se ve zkumavkách získá velké množství DNA. Porušení procesu výzkumu biomateriálů může vést k falešně pozitivnímu nebo falešně negativnímu diagnostickému výsledku. Porušení pravidel alespoň v jednom ze stupňů řetězové reakce může vést k nepravdivému výsledku.

Lékař musí při užívání biomateriálů pečlivě věnovat svým povinnostem. Při rozmazáních nebo škrábání by neměly existovat žádné cizí prvky, například krevní buňky. Současně je pro úplné studium nutné, aby v materiálu bylo dostatečné množství epiteliálních buněk a neporovnatelně shromážděný materiál bude obsahovat velké procento neinformačního hlenu.

Do značné míry je falešně pozitivní výsledek PCG ovlivněn cestou transportu a skladování infikovaných buněk DNA. Kvůli porušení technologických požadavků na proces provádění všech fází studie může infikovaný materiál podstoupit zničení nebo změnit jeho strukturu, což povede k nemožnosti provedení reakce.

Stejně jako všechny ostatní laboratorní testy vyžaduje polymerázová řetězová reakce řádné ošetření všech použitých nástrojů. Laboratoř a personál musí sledovat sterilitu ve všech fázích diagnostických testů. Nedodržování hygienických norem může vést k detekci cizí infekce a falešně pozitivnímu výsledku vyšetření.

Použité reagencie mají velký význam pro kvalitu provedené práce. Pro diagnostiku polymerázovou řetězovou reakcí se DNA umístí do roztoku nukleotidů. Všechny látky musí být použitelné. Snížení procesu vede ke snížení úrovně jeho účinnosti.

Diagnostická metoda založená na PCR poskytuje 100% výsledek. Avšak vzhledem k tomu, že použité materiály jsou velmi citlivé na různé faktory, pouze kvalifikovaná laboratoř může dát naprosto správný výsledek.

Výsledky PCR analýz

PCR-výzkum byl již dlouho zařazen do oblasti laboratorních diagnostických studií různých onemocnění.

Během několika desetiletí vývoje a zlepšování se tato technika stává nepostradatelnou pro dermatovenerologickou službu.

V tomto článku se dozvíte

Jaké jsou studie PCR a jejich výsledky.

Polymerázová řetězová reakce - Jedná se o metodu diagnostiky, která umožňuje identifikovat příčinu choroby.

Unikátní sekvence genetického materiálu, která je přítomna v mikrobiální buňce pouze jednoho druhu nebo kmenu patogenních mikroorganismů, slouží jako požadovaný faktor.

Nejčastěji je cílem studie DNA bakterie nebo viru, metoda PCR však poskytuje výsledky pro RNA mikroorganismů.

Proč používat různé biologické materiály:

  • sliny
  • biopsie tkáně
  • moč
  • cerebrospinální tekutina
  • krve
  • zbytky ze sliznic

Výsledky PCR diagnostiky jsou

údaje o přítomnosti nebo nepřítomnosti onemocnění jsou nejjednodušší a přístupné informace.

Existují metody PCR, jejichž výsledky kromě zjištění infekce umožňují zhodnotit aktivitu infekce, dynamiku onemocnění a reakci na průběžnou léčbu.

Tato volba se nazývá "polymerázová řetězová reakce v reálném čase", která se nejčastěji používá u pacientů s krevním přenosem virových infekcí - hepatitida, HIV.

Hlavní výhodou techniky - nejvyšší citlivost a specifičnost.

Takové analýzy jsou rychle provedeny a velmi přesné.

Předkládáním spolehlivých údajů můžete zahájit léčbu co nejdříve.

Studie PCR sestává ze tří fází:

  • Příprava vzorku po odebrání materiálu.
  • Samotná polymerázní reakce, která spočívá v opakovaném kopírování fragmentů materiálu.
  • Interpretace výsledků.

Výsledky testů PCR jsou pozitivní, pokud je detekován podezřelý patogen.

Pokud ne, výsledek negativní.

Jako takové neexistuje schválená forma formuláře výsledků testů.

To je způsobeno skutečností, že výzkum a fixace dat probíhá počítačem.

Podle toho jsou grafy a údaje ve formuláři zadány způsobem předepsaným softwarem, pod kterým zařízení pracuje.

Proto interpretace výsledků testů vyžaduje zvláštní odbornou přípravu a zkušenosti lékaře.

V případě, kdy se provádí polymerázová řetězová reakce v reálném čase, je počet detekovaných kopií genetického materiálu požadovaného mikroorganismu odděleně uveden v polotovaru výsledků testu.

Samozřejmě, pokud jsou tyto principiálně odhaleny.

Pozitivní výsledek

Veškeré příčinné činitele pohlavně přenosných chorob a infekcí přenášených krví (hepatitida, HIV) se dostávají do lidského těla a začínají se množit, ale vůbec se neukazují.

Existuje takzvaná inkubační doba nebo torpivý latentní průběh infekce.

V takových případech PCR stále nalezne v diagnostickém materiálu genetické markery patogenů během několika dnů od okamžiku infekce.

Aby analýza mohla být pozitivní, je v shromážděném diagnostickém materiálu dostatečná jedna molekula DNA nebo RNA patogenního mikroorganismu.

Pro mnoho raných zařízení existuje technologická citlivost prahu 40 mikrobiálních těles.

Ovšem zpravidla je-li osoba skutečně infikována konkrétní pohlavně přenosnou chorobou nebo STD, má ve vzorcích více než toto číslo a analýza bude pozitivní.

Negativní výsledek

Většinou je tato možnost možná ve dvou případech: osoba není infikována nebo diagnostický materiál není správně shromážděn.

Samozřejmě nelze vyloučit, že koncentrace patogenů ve zkušebním vzorku může být nižší než prah citlivosti zařízení.

Ale taková situace je extrémně vzácná a pokud má lékař pochybnosti, může se analýza po chvíli opakovat.

Pokud výsledky diagnózy PCR zůstanou negativní, pak je osoba zdravá.

V opačném případě, když dostanete druhé testy pozitivní, znamená to, že pacient je infikován a je nutné zahájit jeho léčbu.

Dešifrujte výsledky PCR analýzy u ošetřujícího lékaře

Dešifrujte výsledky PCR analýzy ošetřujícím lékařem, který zná průběh léčby.

V ideálním případě by měl být stejný odborník, který shromažďuje diagnostický materiál pro studii, může pozorovat pacienta a sledovat všechny změny lidského zdraví.

Bohužel klinický průběh moderních pohlavních chorob a infekcí je velmi odlišný od klasického.

V takových případech musí být i výsledky analýz PCR podporovány údaji z jiných studií:

  • mikroskopie skvrn genitální sekrece z močové trubice
  • sérologické reakce krve na protilátky proti určitým patogenům (ELISA, RPGA a další)
  • kulturní kultura

Situace, kdy data různých metod vzájemně odporují, naštěstí se často nedodržují. Například - PCR je pozitivní a ELISA je pozitivní.

K tomu dochází na konci léčby pacienta, kdy již byly patogenní mikroorganismy zničeny a v lidském těle nejsou takové patogeny.

Ale protilátky (imunoglobuliny) proti antigenům patogenů infekce stále cirkulují v krvi po dobu několika týdnů nebo dokonce měsíců, let.

Při klinickém zotavení se tento rozdíl interpretuje ve prospěch PCR, protože jeho výsledky jsou přesnější než studie založené na protilátkách.

Kultivace je považována za nejcitlivější, ale trvá několik dní nebo dokonce týdnů, aby získala své výsledky.

Proto se bakteriologický výzkum provádí pouze tehdy, když PCR nemůže poskytnout zaručenou přesnou odpověď.

Je důležité porovnat získané údaje o analýzách s klinickými znaky průběhu infekce.

Takže v některých případech je výsledek PCR pozitivní, ačkoli příčinná látka je úspěšně eliminována imunitním systémem.

Protože pacient právě dokončil léčbu v jeho těle, stále zůstávají mrtvé patogenní mikroorganismy.

Jejich genom bude nalezen, ale přesto pozitivní výsledek neznamená přítomnost nemoci.

Falešně negativní výsledek analýzy PCR je možný:

  • při špatném přístupu k pacientovi
  • převzetí materiálu, který není z požadovaného biologického prostředí

Velmi důležité je důkladné objasnění všech detailů a nuancí této nemoci.

Zvláštní pozornost by měla být věnována tomu, co a jak se člověk aplikuje od okamžiku nástupu prvních příznaků do hledání kvalifikované lékařské péče.

Například - antibiotika, které lze koupit v jakékoliv lékárně.

Samoléčba často vede k významnému snížení počtu mikrobů, kvůli kterým může dojít k falešně negativnímu výsledku analýzy PCR.

To znamená, že role člověka, doktora, se snižuje pouze proto, aby správně shromáždila diagnostický materiál a pak rozluštila výsledky.

Diagnostické schopnosti metody

Tato metoda laboratorního výzkumu je velmi univerzální.

Existuje diagnostika PCR:

  • pohlavně přenosných infekcí.
  • Také některé patogeny respiračních onemocnění (pertus, bronchosepticosa)
  • obzvláště nebezpečné infekce (HIV), hepatitida
  • příčinných činitelů střevních infekcí (rotavirus, salmonella, Helicobacter pylori)
  • chřipkové viry a další.