Analýza krve na TMS, co to je

Diety

Tandemová hmotnostní spektrometrie (TMS) je jednou z moderních metod analýzy sloučenin, která se široce používá pro různé vědecké i praktické účely. Tato metoda umožňuje analýzu několika stovek sloučenin v mikrokvantitách biologického materiálu.

Kde je tato metoda použita?

Ve světové praxi zdravotní péče se tato metoda používá pro masový screening novorozenců pro dědičná metabolická onemocnění (NBD). V místě sušené krve je možné stanovit aminokyseliny (včetně fenylalaninu) a acylkarnitiny. Kvantitativní stanovení těchto látek umožňuje vyloučit několik desítek zděděných onemocnění patřících do různých tříd NBO (metabolické poruchy aminokyselin, organické kyseliny a defekty mitochondriální β-oxidace mastných kyselin). Podle zahraničních literárních údajů jejich celková četnost je 1: 2000 živých novorozenců. Dříve bylo pro diagnostiku těchto poruch vyžadováno velké množství biologického materiálu, které provedly několik studií (analýza aminokyselin, chromatografická hmotnostní spektrometrie, stanovení spektra acylkarnitinů), což vyžadovalo značné časové a materiálové náklady. TMS umožňuje kvantifikovat všechny tyto sloučeniny během jedné analýzy!

Jaké nemoci lze pomocí této metody zjistit?

Bohužel neexistuje univerzální vysoce citlivý a specifický test pro diagnostiku všech známých NBO, ale technologie zaměřené na identifikaci několika desítek až stovek nemocí v jedné analýze se již stávají realitou. Pro takové metody platí TMS. Tato metoda umožňuje s vysokou spolehlivostí identifikovat asi 40 dědičných metabolických poruch aminokyselin, organických kyselin a defekty mitochondriální beta oxidace mastných kyselin. Většina těchto onemocnění se vyskytuje během období novorozenců. Seznam onemocnění, které lze diagnostikovat pomocí této technologie, je uveden v sekci analýzy http://labnbo.ru/prajs-list

Proč je nutné diagnostikovat metabolické nemoci co nejdříve?

Mnoho lékařů se mylně domnívá, že NBO jsou tak vzácné, že je nutné je vyloučit pouze na posledním místě a velmi často správná diagnóza je stanovena již později nebo není nemoc diagnostikována vůbec.

Přesto je známo více než 150 forem NBO, pro které byly vyvinuty metody účinné terapie a kolik závisí život a zdraví pacienta na tom, jak rychle a správně je stanovena diagnóza. Pro 20 onemocnění, u kterých lze diagnostikovat TMS, bylo vyvinuto zvláštní ošetření. Dodané včas diagnostiku - uložený život a zdraví pacienta!

Pravidla pro sběr vzorků krve

Krev se odebírá na standardní filtrační kartě (č. 903), která se používá pro screening novorozenců na PKU. Krev může být kapilární (od prstu, paty) a žil. Je nutné, aby byla vybraná oblast dobře impregnována! Na kartě filtru musí být jasně uvedeno jméno, od koho a odkud byl pacient odeslán, datum narození a telefonní číslo ošetřujícího lékaře. Vzorek se suší ve vzduchu po dobu 2-3 hodin. Doporučuje se připojit výňatek z anamnézy.

Příklad správného sběru vzorků krve:

Příklady nevhodného sběru vzorků krve:

Spousta malých skvrn

Vzorek nebyl vysušen až do konce, což vedlo k rozmazání vzorku během přepravy.

Filtrační papír byl špatně impregnován krví.

Užitečné odkazy:

(NCBI) je informační zdroj pro molekulární biologii založený v roce 1988. Databáze PubMed obsahuje více než 15 000 000 článků z různých biomedicínských časopisů (v angličtině).

Katalog lidských genů a genetických onemocnění, vytvořený Dr. V.A. McKusick a jeho kolegové (v angličtině).

(SSIEM) - Společnost pro studium dědičných metabolických onemocnění (vrozené metabolické chyby).

Federální státní rozpočet Vědecká instituce "Centrum lékařské genetické vědy"

Informační portál o vzácných nemocech, možnosti jejich léčby a diagnostiky u pacientů se vzácnými onemocněními

Celosurská společnost zřídka nemocí byla založena v roce 2012 na základě iniciativy pacientů, členů jejich rodin a odborníků. Do dnešního dne VOZ sdružuje více než 400 pacientů z 47 oblastí Ruské federace se 63 vzácnými onemocněními.

Analýza krve na TMS, co to je

Během let se většinou provádí screening testy, specifické pro každou jednotlivou chorobu. Například screening PKU byl založen na mikrobiologickém nebo chemickém hodnocení zvýšení fenylalaninu.

Tato situace se v poslední době zcela změnila desetiletí s příchodem technologie tandemové hmotnostní spektrometrie (TMS). Analýza tandemové hmotnostní spektrometrie (TMS) může nejen přesně a rychle detekovat zvýšenou fenylalanin krevní skvrny u novorozenců s menším počtem falešných pozitivních reakcí ve srovnání se staršími způsoby, ale také umožňuje detekovat současně několik desítek dalších biochemických poruch.

Některé z nich již byly promítány individuální testy. Například, mnoho států použity specifické testy pro detekci zvýšené methionin, pro detekci tandemové hmotnostní spektrometrie (TMS) byl také žádná spolehlivá metoda pro určité nemoci příslušných kritérií screeningu screeningu-onatalnogo ale neměl žádný spolehlivý test, dříve.

Například, MCAD deficience - onemocnění oxidace mastných kyselin, obvykle asymptomatické, ale klinicky zjistitelné, když pacient zvyšuje katabolismus. Detekce deficitu MCAD při narození by mohlo být důležité, jako nemocné děti mají velmi vysoké riziko život ohrožující hypoglykémie v raném dětství s katabolických stavů způsobených mezi kurrentnymi onemocnění, jako je virová infekce.

Téměř čtvrtina dětí nediagnostikovaný nedostatek MCAD zemřou v první epizodě hypoglykemie. Při správné léčbě může být metabolická porucha zakotvena. Při nedostatku MCAD je primárním cílem screeningu varovat rodiče a lékaře před rizikem metabolické dekompenzace, protože děti mezi záchvaty jsou prakticky zdravé a nepotřebují každodenní léčbu, s výjimkou dlouhodobého hladování.

Nicméně použití tandemová hmotnostní spektrometrie (TMS) pro neonatální screening zůstává otázkou. Kromě poskytování rychlého testování mnoha poruch, novorozenecký screening, u nichž se již provádí nebo by mohlo být odůvodněno, tandemová hmotnostní spektrometrie (TMS), rovněž identifikuje kojenců s dědičných metabolických poruch, jako metylmalonovou acidemií, obvykle nejsou zahrnuty do screeningového programu vzhledem k jejich vzácnosti a obtížnost poskytnutí konečná léčba, která zabraňuje progresivnímu neurologickému zhoršení.

Nemoci zjištěné tandemovou hmotnostní spektrometrií

I. Aminokyselina:
- PKK
- Nemoci moči s vůní javorového sirupu
- Homocystinurie
- Citrulinémie
- Arginin-jantarová acidurie
- Tyrosinémie typu I

II. Organická kyselina:
- Propionová acidémie
- Methylmalonic acidemia
- Isovalerová acidémie
- Izolovaná 3-methyl-crotonylglycinemie
- Glutarová acidémie (typ I)
- Mitochondriální deficit acetoacetyl-coA-thiolázy
- Hydroxymethylglutarová acidémie
- Nedostatek více karboxylas CoA

III. Poruchy oxidace mastných kyselin:
- Nedostatečný SCAD
- Nedostatek hydroxy-SCAD
- Nedostatečná MCAD
- Nedostatečná VLCAD
- Nedostatek LCAD a nedostatečnost trifunkčního proteinu
- Glutarová acidémie typu II
- Nedostatek karnitin-palmitoyltransferázy II

Tandemová hmotnostní spektrometrie (TMS) mohou také identifikovat abnormální metabolity s nejistou hodnotou pro zdraví. Například SCAD deficience je další choroba oxidace mastných kyselin, nejčastěji asymptomatická, ačkoli někteří pacienti mohou mít potíže spojené s epizodickou hypoglykemií. Přediktivní hodnota pozitivního výsledku analýzy tandemové hmotnostní spektrometrie (TMS) pro symptomatický SCAD je tedy pravděpodobně velmi nízká.

Má výhoda detekce větší váhu Nedostatek SCAD negativní účinek testu způsobující neodůvodněnou úzkost rodičů u většiny novorozenců s pozitivním výsledkem testu, kteří nikdy nevykazovali klinické příznaky? Proto ne každá nemoc zjištěná metodou tandemové hmotnostní spektrometrie (TMS) splňuje kritéria pro screening novorozence.

To je důvod, proč některé odborníků v systému zdravotní péče se tvrdí, že rodiče a lékaři by měli hlásit pouze abnormality metabolitů s prokázaným klinickým přínosem. Ostatní zastáncem využívání veškerých informací poskytnutých tandemovou hmotnostní spektrometrií (TMS) a nabízejí informovat lékaře a rodiče všechny abnormální metabolity, bez ohledu na to, jak dobrý kritéria onemocnění odpovídají standardnímu novorozeneckého screeningu. V budoucnu můžete pečlivě sledovat pacienty s anomáliemi neznámého významu. Ze všech těchto důvodů zůstává tématem diskuse využití tandemové hmotnostní spektrometrie (TMS) pro screening novorozenců.

Pro populační screening v předčasném období se obvykle používají dva testy: chromozomální analýza u starších žen a AFP mateřského séra nebo trojitý test na DNT a chromozomální aneuploidii.

Pokud těhotenství ohrožena kvůli yn - invazivní postupy pro prenatální diagnostiku chromozomálních aneuploidií vzhledem k věku matky, by měly také nabídnout další kontrolu, například stanovení úrovně AFP v plodové vodě, celogenomové vyhledat srovnávací hybridizační nebezpečné submikroskopické delece, mutace screening cystické fibrózy a dalších běžných nemocí.

Analýza krve na TMS, co to je

Tandemová hmotnostní spektrometrie je jednou z moderních metod analýzy sloučenin, která se široce používá pro různé vědecké i praktické účely. Tato metoda umožňuje analýzu několika stovek sloučenin v mikrokvantitách biologického materiálu. Ve světové zdravotní praxi se tato metoda používá k hromadnému screeningu novorozenců pro dědičná metabolická onemocnění (NBD). V místě sušené krve je možné stanovit aminokyseliny (včetně fenylalaninu) a acylkarnitiny. Kvantitativní stanovení těchto látek umožňuje vyloučit několik desítek dědičných onemocnění, které patří do různých tříd NBO (metabolické poruchy aminokyselin, organické kyseliny a defekty mitochondriální b-oxidace mastných kyselin). Dříve bylo pro diagnostiku těchto poruch vyžadováno velké množství biologického materiálu, které provedly několik studií (analýza aminokyselin, chromatografická hmotnostní spektrometrie, stanovení spektra acylkarnitinů), což vyžadovalo značné časové a materiálové náklady. TMS umožňuje kvantifikovat všechny tyto sloučeniny během jedné analýzy! Dědičná porucha metabolismu aminokyselin, organických kyselin a defekty mitochondriální beta oxidace mastných kyselin mají asi 100 nosologických forem, z nichž většina se projevuje v novorozeneckém období. Jejich frekvence je více než 1: 5000 živých novorozenců. Mnoho lékařů se mylně domnívá, že onemocnění této skupiny jsou tak vzácné, že je nutné je vyloučit pouze na posledním místě a velmi často správná diagnóza je stanovena již později nebo není nemoc diagnostikována vůbec.

Během analýzy bylo 52 indikátorů (aminokyselin a acylkarginium)

Testovací materiál: krevní kapilára v suché formě

Příprava na studium: ne

Dny příjmu: během pracovní doby zdravotního střediska

Č. NBO1, Screening novorozenců. "Pátý" (analýza spektra aminokyselin a acylkarnitinů)

  • Podobné případy onemocnění v rodině.
  • Případy náhlé smrti dítěte v raném věku v rodině.
  • Ostré zhoršení stavu dítěte po krátkém období normálního vývoje (asymptomatický interval může trvat několik hodin až několik týdnů).
  • Neobvyklý tělesný zápach a / nebo moč ("sladká", "myš", "vařené zelí", "propasované nohy" atd.).
  • Neurologické poruchy - duševní poruchy (letargie, kóma), různé typy konvulzivních záchvatů, změny svalového tonusu (svalová hypotenze nebo spastická tetrapareze).
  • Porušení rytmu dýchání (bradypnoe, tachypnoe, apnoe).
  • Poruchy jiných orgánů a systémů (poškození jater, hepatosplenomegalie, kardiomyopatie, retinopatie).
  • Změny laboratorních parametrů krve a moči - neutropenie, anémie, metabolická acidóza / alkalózu, hypoglykémie / hyperglykémie, zvýšené aktivity jaterních enzymů a hladin kreatinkinázy, ketonurie.
  • Dodatečná diagnóza 37 dědičných metabolických onemocnění spolu s povinným státním programem pro detekci 5 dědičných onemocnění: screening novorozenců: "PYATOCHKA".

Interpretace výsledků výzkumu obsahuje informace pro ošetřujícího lékaře a není diagnózou. Informace z této části nelze použít pro vlastní diagnostiku a samoléčbu. Správnou diagnózu provádí lékař, a to jak s použitím výsledků tohoto průzkumu, tak s potřebnými informacemi z jiných zdrojů: anamnéza, výsledky dalších průzkumů atd.

Jednotky v laboratoři INVITRO: μmol / litr.

LABORATOŘ HEREDITÁRNÍCH CHOROB VÝMĚNA LÁTEK

Indikace pro analýzu TMS

Klinická diagnostika vrozených metabolických poruch aminokyselin, organických kyselin a defektů b-oxidace mitochondrií může představovat určité obtíže, protože tyto nemoci nemají specifické specifické příznaky a symptomy. Proto studie všech pacientů oddělení patologických novorozenců, jednotek intenzivní péče o děti může pomoci při rychlé detekci těchto dědičných onemocnění.

Indikace pro studium acylkarnitinů a aminokyselin TMS jsou:


7. Změna krve a moči - trombocytopenie, neutropenie, anémie, metabolická acidóza / alkalózu, hypoglykémie / hyperglykémie, zvýšené jaterní enzymy a hladiny kreatinkinázy, ketonurií.

Genetické testy

Dívky, neurolog, poslané do genetiky (řekla, že mozková obrna není naší diagnózou, ačkoli ji převzala do sanatoria pro léčbu). Řekněte mi, kdo čelil tomu, kolik je přibližně? Ještě nevím, na co budeme posílat, ale chtěl bych vědět, co se má připravit, není to všeobecný krevní test...

Mobilní aplikaceŠťastná máma 4.7 Komunikace v aplikaci je mnohem pohodlnější!

Nemůžu říct. všechno může být. a všechno se liší různými způsoby

Všechno jsme se vzdali! Karyotyp 4000 rublů., TMS 4000 rublů amminokisloty moči 4krát (10.000 rublů pro všechny), amminokisloty krev 4x také asi 10.000 rublů, 12.000 rublů Dravet syndrom, laktát mnohokrát, ne levné konzultace genetika a kdoví co ještě „po- Malé věci. "Genetická vyšetření není levná!

Multi-steroidní krevní test: stanovení vitálních lidských hormonů na kvalitativně novou úroveň

Výraz "multi-steroidní analýza" se týká stanovení profilu steroidních hormonů metodou chromatografie-hmotnostní spektrometrie. Souhrn výsledků této analýzy označuje termín "steroidní profil". V podstatě se jedná o dva ekvivalentní výrazy, které označují totéž.

Multisteroidny analýza - domácí vývoj, technika analýzy validované a certifikované jako „metoda (metoda) měření hmotnostní koncentrace steroidních hormonů v krevních vzorcích pomocí kapalinové chromatografie. - tandemovou hmotnostní spektrometrií Mus 08-47 / 376“, registrovaná v rejstříku Rosstandart pod číslem FR.1.31.2015.21875.

V současné době není multiseroidová analýza zařazena do seznamu testů schválených Ministerstvem zdravotnictví Ruské federace a je prováděna v rámci vědeckého výzkumu. Pacienti samotní jsou nuceni platit náklady na tuto analýzu. Práce probíhají, aby se zajistilo, že v budoucnu budou tyto výdaje kryty pojišťovacími léky.

Kvantitativní stanovení hlavní steroidní hormony a sérové ​​metabolity nebo slin referenční metoda kapalina - plynová chromatografie-tandemové hmotnostní spektrometrie (v literatuře je tato metoda se také označuje jako LC-MS / MS) - pracného a nákladný postup. Klíčovým znakem způsobu je schopnost definovat všechny deklarované analytů v jednom testu (obr. 1), ale na základě stanovení hodnoty analytu získané málo pravděpodobné ne méně než alternativní imunochemických metod.

Obrázek 1. Analýzy stanovené během jedné analýzy podle postupu

Proč je název techniky označující označení "krev" biomateriálu?

Aby byl okamžitě odlišen od široce známé analýzy "steroidního profilu moči". Je třeba poznamenat, že informační obsah analýzy moči je zcela odlišný a vyžadují rozdílné zacházení, jak je obsažen v moči velmi neaktivní formy steroidů: sulfáty, glukuronidy a hydroxylovaných derivátů nežádoucí organismus, a na výstupu z něj. V krvi jsou stanoveny koncentrace aktivních forem steroidních hormonů, které cirkulují v systému obecného přívodu krve, vstupují do buněk a mají signalizační účinek na genom.

Za jakých zdravotních stavů je definice steroidního profilu krve ukázána, na kterou lékaři pomohou diagnostiku steroidního profilu krve?

1. všechny druhy vrozené dysfunkce kůry nadledvin (VDKN). VDKN je vrozené onemocnění, které se projevuje v porušení biosyntézy steroidů. Je způsobena porušením fungování jednoho z pěti enzymů kůry nadledvin. Může to být nedostatek 21a-hydroxylázy (CYP21) nebo 11b-hydroxylázy (CYP11B1). Tradiční novorozenec metody screeningu VDKN imunoanalytické často falešně pozitivní výsledky stanovení 17-hydroxyprogesteronu. Proto je ve všech sporných případech nutná potvrzující diagnóza pomocí LC-MS / MS [1]. Diagnostika neklasické formy VDKN (NF) VDKN imunochemických metod představuje značné potíže, takže NF VDKN často není diagnostikována novorozeneckého screeningu, ale díky projevuje později: u mladistvých objeví růst předčasné vlasů, akné; dívky - hirsutismus, menstruační dysfunkce, reprodukční poruchy. Pro steroidní profil, pokud NF VDKN vyznačuje zvýšenou 21-deoxykortizolu a 17-OH-progesteron, nicméně multisteroidny analýza v kombinaci s genetickým testováním je velmi užitečné pro diagnostiku onemocnění.

2. Nadledvinová nedostatečnost. Za tímto účelem se provádí stimulační test s ACTH a měří se hladiny kortizolu, aldosteronu a 11-deoxykortizolu: bazální, 30 a 60 minut po stimulaci. Při primární adrenální nedostatečnosti aldosteron nereaguje na stimulaci, zatímco u sekundární insuficience se zaznamenává zvýšení jeho hladiny. V kontrolní skupině se hladina 11-deoxykortizolu zvyšuje 15-20krát v reakci na stimulaci ACTH a kortizol - přibližně 3krát [2].

3. Hypogonadismus u mužů. Pro správnou diagnózu hypogonadismu u mužů je nutné stanovit přesnou úroveň celkového testosteronu (TT) za použití hmotnostní spektrometrie. Ve studii 10 000 dobrovolníků bylo zjištěno, že pokud je koncentrace CT nižší než 12,1 nmol / l podle údajů hmotnostní spektrometrie, může být provedena diagnóza hypogonadismu [3].

4. Kontrola substituční léčby u mužů a žen (HRT). U těchto pacientů, hmotnostní spektrometrie je „zlatý standard“, protože umožňuje zvolit správnou terapeutickou dávku hormonu (nebo stimulátoru) stopou v detailu se reakce všech metabolitů v substituční terapie a, aby se zabránilo rušení inherentní imunochemických metod [4-6].

5. Je velmi důležité sledovat hladiny steroidních hormonů během těhotenství a do jednoho roku po porodu. Multi steroidy poskytují mnohem přesnější informace o stavu androgenu ve srovnání s tradičním DHEA-sulfátem.

6. Gynekologie. "Virilizující" (androgeny produkující) adrenální nádory mají aktivitu produkující androgeny a způsobují vývoj virilního syndromu u žen. Bylo zjištěno, že prakticky jakýkoli hormonálně aktivní nádor vaječníků může být zdrojem nadměrné produkce androgenů a / nebo estrogenů a měl by být diagnostikován pomocí metody tandemové hmotnostní spektrometrie [7].

7. Diabetes. Toto onemocnění ovlivňuje nervový systém a ovlivňuje koncentraci neurosteroidů. LC-MS / MS umožňuje stanovit koncentrace neuroaktivních steroidů s cílem vyvinout nové přístupy při léčbě diabetické nefropatie [8].

8. Sportovní medicína. Steroidní profil sportovců v krvi a slinách může poskytnout důležité informace o svém zdravotním stavu, atletické formě, řídit průběh tréninku díky optimálnímu rozložení zátěže.

Analýza více steroidů sotva živí sama o sobě, vzhledem k širokému rozšíření imunologických testů a odolnosti přívrženců tradičních technologií. Ale za touto metodou je budoucnost, která je již uznána za nejlepší představitele lékařské vědy [9].

Co je ALS

Amyotrofická laterální skleróza je nejčastější formou onemocnění motorických neuronů, což je neurodegenerativní onemocnění, které postihuje motorické neurony v mozku a míchu

Diagnostika ALS

Symptomy ALS se mohou lišit u různých lidí, protože onemocnění má individuální charakter a rychlost progrese.

Amyotrofická laterální skleróza je mimořádně obtížně diagnostikována z několika důvodů:

  • toto je vzácné onemocnění;
  • včasné příznaky jsou poměrně snadné, například neohrabanost, nepříjemnost v rukou nebo mírně tuhá řeč, zatímco všechny výše uvedené mohou být výsledkem zcela odlišných důvodů;
  • onemocnění postihuje každou osobu jinak, neexistuje žádný definitivní symptom, který je jasně určen ALS.

Pokud má terapeut podezření, že má pacient ALS, měl by ho předat neurologovi. Poté může mít osoba řadu diagnostických vyšetření, které lze provést jak v ambulantní, tak i v ambulantní.

Krevní test

Studie ukazují, zda je hladina kreatinkinázy zvýšená v krvi. Tento enzym se produkuje, když je svalová tkáň zničena a její hladina může být zvýšena u lidí trpících ALS. Tento ukazatel však není specifickým příznakem ALS, protože může být ukazatelem dalších onemocnění.

Elektronéromyografie (ENMG)

U ENMG jsou pro zaznamenávání nervových impulzů v jednotlivých svalech používány tenké jehly. Záznam se obvykle provádí z každého končetin a bulbárních (hltanových) svalů. Svaly, které ztratily inervaci, jsou zjištěny, protože jejich elektrická aktivita se liší od aktivity zdravých svalů. Výsledky ENMG se mohou lišit od normálních, a to i v případě, že daný sval ještě není chorobou ovlivněn.

U ENMG je také kontrolována rychlost impulsu podél nervových vláken. Za tímto účelem se elektrický impuls prochází malým těsněním v kontaktu s pokožkou. To je velmi důležitá diagnostická metoda pro studium.

Transkraniální magnetická stimulace (TMS)

Jedná se o novou metodu, kterou lze provést současně s ENMG. Je určen k vyhodnocení stavu motorických neuronů mozku. Výsledky TMS mohou pomoci při diagnostice.

Magnetické rezonanční zobrazování (MRI)

MRT může detekovat poškození nervového systému způsobené mrtvicí, Alzheimerovou chorobou, Parkinsonovou chorobou, roztroušenou sklerózou, nádory a poranění míchy. MRT nezjistí žádné zvláštní změny v ALS, protože škody způsobené touto chorobou se na snímcích nezobrazují. Tato metoda výzkumu se používá k vyloučení nemocí s příznaky podobnými ALS.

Jiné metody

Neurológ může rozhodnout o provedení dalších vyšetření, jako je například bederní punkce nebo svalová biopsie, pokud něco naznačuje jejich potřebu. Tato vyšetření však nejsou vždy používána při diagnostice ALS.

Aplikace tandemu
hmotnostní spektrometrie (HPLC-MSMS)
v klinické diagnóze

Hmotnostní spektrometrie je vyhlídka na vývoj klinické chemie, budoucnost, v níž revoluce v klinické diagnóze povede k rozšířenému použití hmotnostní spektrometrie.
(Michael Ulerich, Katedra klinické chemie, Univerzita Georgea Augusta, Goettingen, Německo)

Podle průzkumu zveřejněného v klinických biochemik Reviews, použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií (HPLC-MS / MS) v klinických laboratořích se výrazně zvýšil v posledních 10-12 letech. Autoři na vědomí, že analýza specifičnost pomocí HPLC-MS / MS je významně lepší než imunologické metody a klasickou vysoce účinné kapalinové chromatografie (HPLC) pro analýzu molekul s nízkou molekulovou hmotností a má podstatně vyšší výkon než plynové chromatografie s hmotnostní spektrometrií (GC-MS). Popularita této metody v rutinních klinických analýzách je nyní vysvětlena jedinečnými schopnostmi metody.

    Hlavní výhody metody HPLC-MS / MS jsou:

  • Možnost přesné kvantitativní analýzy malých molekul;
  • Současná analýza souboru cílových sloučenin;
  • Jedinečná specifičnost;
  • Vysokorychlostní analýza.
  • V uplynulých letech se věnuje velká pozornost době analýzy a v důsledku toho rostoucí laboratorní produktivitě. Významné snížení doby analýzy bylo možné díky použití kratších sloupců pro analytickou HPLC / MS / MS zároveň výrazně zvýšit specifičnost testu. Použití atmosférického tlaku ionizace (API), tandemový trojitý čtyřpólový hmotnostní spektrometr a zlepšené vysokoúčinné kapalinové chromatografie, a souvisejících způsobů přípravy vzorků vedla HPLC-MS / MS v prvních řadách moderních analytických metod pro klinické studie.

      Hlavní aplikace HPLC / MS / MS v klinické medicíně:

  • Získání úplného profilu metabolismu steroidů (panelů), purinů a pyrimidinů a dalších sloučenin,
    screening novorozenců na vrozené metabolické chyby (detekce několika desítek onemocnění pro jednu analýzu);
  • Terapeutické sledování léků - imunosupresiv, antikonvulziv, antiretrovirových, antikoagulancií a dalších - bez ohledu na dostupnost souprav výrobce. Nemusíte kupovat drahé sady pro každou látku - můžete si vytvořit vlastní metody;
  • Klinická toxikologie - analýza více než 500 narkotických sloučenin a jejich metabolitů v jedné analýze bez potvrzující analýzy
    proteomiky a metabolomiky.
  • Kromě toho, HPLC IUMI použity pro screening oligosaharidove močového sulfatidu dlinotsepochechnyh mastných kyselin dlinotsepochechnyh žlučové kyseliny, kyselé methylmalonová, porfyrie studie, screening pacientů s poruchami purinové a pyrimidinové metabolismu.

    Příklady kapalinové chromatografie
    v kombinaci s tandemovou hmotnostní spektrometrií v klinických analýzách.

    Screening novorozenců: První příklad masové aplikace HPLC-MS / MS v klinické diagnóze byl screening vrozených metabolických chyb u novorozenců. V současné době v rozvinutých zemích, je rutinní metodou a pokrývá více než 30 různých onemocnění, včetně atsedemii, aminoatsidopatii, vad oxidace mastných kyselin. Za zvláštní zmínku stojí studium vrozených vad, které mohou vést k vážným problémům, pokud nechcete přijmout okamžitá opatření (například zvětšení srdce nebo jater nebo otoku mozku). Výhodou použití HPLC-MS / MS pro novorozeneckého screeningu je možnost současného analýze všech aminokyselin a acylkarnitinů rychlé, levné a vysoce specifické metody.

    Terapeutické sledování léčivých přípravků: Vývoj a zavedení imunosupresiva sirolimus (rapamycin), aby se zabránilo odmítnutí transplantovaného orgánu po transplantaci bylo významně realizace pobídka HPLC-MS / MS v klinických laboratořích. Moderní metoda HPLC-MS / MS umožňuje simultánní stanovení takrolimu, sirolimu, cyklosporinu, everolimu a kyseliny mykofenové.

    HPLC-MS / MS se také používá pro analýzu cytotoxických, antiretrovirových léků, tricyklických antidepresiv, antikonvulsiv a jiných léků vyžadujících individuální dávkování.

    Metoda HPLC-MSMS umožňuje oddělit a kvantifikovat R- a S-enantiomery warfarinu v koncentračním rozmezí 0,1-500 ng / ml.

    Narkotika a analgetika: Pro analýzu těchto sloučenin se široce používá HPLC-MS / MS kvůli jednoduchosti přípravy vzorku a krátké době analýzy. V současné době se tato metoda používá v klinických laboratořích k screeningu přítomnosti široké škály narkotických látek. Jedinečná specifičnost a citlivost metody umožňuje současně analyzovat více než 500 sloučenin různých tříd v jednom vzorku s minimální přípravou vzorku. Takže v případě analýzy moči je jednoduché zředění vzorku 50 až 100krát. Při analýze vlasů namísto svazku 100-200 vlasů stačí jediné vlasy pro spolehlivé odhalení skutečností o konzumaci narkotik.

    Endokrinologie a steroidní analýza: HPLC-MS / MS je široce používán v mnoha laboratořích pro analýzu endokrinní steroidy - testosteron, kortizol, aldosteron, progesteron, estriol, a mnoho dalších.

    Stále více laboratoří začíná používat HPLC-MS / MS ke stanovení hladin vitaminu D3 a D2 v krvi.

    I. Stanovení steroidů (profil steroidů).

    Laboratoře v nemocnicích a na klinikách mají současně příležitost současně určit několik steroidů pomocí HPLC / MS / MS. To nevyžaduje velký objem vzorku, což je zvláště důležité při analýze vzorků dětí.

      Případy, kdy je vhodné definovat několik profilů steroidů:

  • Kongenitální adrenální hyperplazie (kongenitální adrenální hyperplazie, CAH) je vrozená vada steroid biosyntéza. Jedná se o dědičnou skupinu nemocí způsobených nesprávnou aktivitou enzymů kůry nadledvin, což vede ke snížení produkce kortizolu. Pro spolehlivou diagnózu SAN se doporučuje stanovit kortizol, androstendion a 17-hydroxyprogesteron. HPLC / MS / MS umožňuje přesnou kvantifikaci všech tří steroidů v jednom testu se 100% jistotou.
  • Rutinní screening novorozenců pomocí imunoanalýz je charakterizován vysokou úrovní pozitivních a falešně negativních výsledků. Stanovení pomocí HPLC / MS / MS nejen kortizolu a aldosteronu, ale i 11-deoxykortizolu rozlišovat primární adrenokortikální nedostatečnost ze sekundární.
  • HPLC / MS / MS umožňuje stanovení steroidů při prostatitidě a chronickém bolesti pánevního syndromu.
  • HPLC-MS / MS umožňuje určit profil steroidů a identifikovat příčiny předčasné puberty spojené s kůrou nadledvin u malých dětí. Bylo zjištěno, že koncentrace testosteronu, androstendionu, dehydroepiandrosteron (DHEA) a jeho sulfátu v těchto dětí byly mírně vyšší než u starších dětí v kontrolní skupině.
  • Sérové ​​aktivní kuřáci, pasivní kuřáci a nekuřáci, se analyzuje na přítomnost 15 steroidních hormonů a hormony štítné žlázy pro studium vztahu mezi pacienty vystaveny kouři, a koncentrace hormonů.
  • HPLC / MS / MS se používá při profilování některých ženských steroidních hormonů v moči.
  • S použitím HPLC / MS / MS byly vyhodnoceny koncentrace neuroaktivních hormonů, aby se zabránilo diabetické neuropatii.
  • II. Stanovení hormonů štítné žlázy

    Rutinní metody pro stanovení hormonů štítné žlázy obvykle vycházejí z radioimunoanalýzy, což je nákladné a umožňuje stanovit pouze T3 a T4, což může omezit schopnost stanovit a plně regulovat funkci štítné žlázy.

    • V současné době s použitím HPLC IUMI simultánní analýzu provedenou v pěti vzorcích séra hormonů štítné žlázy, včetně tyroxin (T4), 3,3‘, 5-trijodthyronin (T3), 3,3', 5'-(rT3), 3, 3'-diiodothyronin (3,3'-T2) a 3,5-dijodothyronin (3,5-T2) v koncentračním rozmezí 1 až 500 ng / ml.
    • Metoda HPLC / MS / MS se také používá k analýze hormonálního složení pacientů, kteří podstoupili tyroidektomii. Stanoví se koncentrace tyroxinu (T4), trijodthyroninu (T3), volné T4 a štítné žlázy stimulující hormon (TSH) po operaci. Bylo zjištěno, že HPLC / MS / MS je vynikajícím způsobem, jak stanovit vztah mezi TSH a koncentracemi hormonu štítné žlázy.
    • Pro stanovení thyroxinu (T4) v lidských slinách a v séru byla použita metoda HPLC / MS / MS. Metoda je charakterizována vysokou reprodukovatelností, přesností a detekčním limitem 25 pg / ml. Studie ukázaly, že existuje závislost na koncentracích T4 v slinách mezi euthyroidními subjekty a pacienty s Gravesovou chorobou.

    Metoda HPLC / MS / MS má v současné době citlivost, specifičnost a přesnost potřebné k spolehlivému stanovení všech steroidů v biologických tekutinách, a tím zvyšuje diagnostické schopnosti, zejména při stanovení steroidů.

    III. Stanovení 25-hydroxyvitaminu D pomocí HPLC / MS / MS

    25-hydroxy vitamin D (25OD) je hlavní cirkulující forma vitaminu D a prekurzoru jeho aktivní formy. (1,25-dihydroxyvitamin D). Vzhledem k jeho dlouhému poločasu je definice 25OD důležitá pro stanovení stavu vitaminu D v těle pacienta. Vitamin D existuje ve dvou formách: vitamín D3 (cholekalciferol) a vitamin D2 (ergocalciferol). Obě formy jsou metabolizovány do odpovídajících 25OD forem. Velmi důležité pro diagnózu je dostupnost analytických metod, které mohou s vysokou přesností stanovit obě formy vitamínu a umožnit monitorování pacientů s poruchami vitaminu D. Dosud používané metody neumožňují samostatné stanovení vitaminu D2 a D3. Navíc při vysokých koncentracích vitaminu D2 je detekovatelné množství D3 podceňováno. Další nevýhodou je použití radioaktivních izotopů. Použití metody HPLC / MS / MS nejen zabránilo použití radioaktivních izotopů, ale také provedlo samostatné stanovení obou aktivních forem vitaminu.

        Metoda je použitelná pro následující pacienty:

  • Pokud existuje podezření na snížení obsahu vitaminu D v těle;
  • Pokud je podezření na nevhodný toxický účinek;
  • Při vyšetření pacientů, kteří podstoupili léčbu pro snížený obsah vitaminu D;
  • Použití HPLC / MS / MS umožnilo samostatné stanovení obou forem při sledování pacientů.
  • IV. Stanovení imunosupresiv pomocí HPLC / MS / MS

    Po transplantaci orgánů je nutné užívat imunosupresiva po celý život, aby se předešlo odmítnutí. Při velmi úzkém terapeutickém rozmezí a vysoké toxicitě vyžadují imunosupresiva jednotlivá dávka pro dosažení maximálního účinku. Proto je důležité sledovat hlavní imunosupresiva: cyklosporin A, takrolimus, sirolimus a everolimus, které regulují dávku léku pro každého jednotlivého pacienta v závislosti na koncentraci léčiva v krvi.

    Imunoanalýza se stále používá k monitorování uvedených léků, nicméně tyto metody jsou drahé a jejich specificita, přesnost a reprodukovatelnost jsou omezené. Byly zaznamenány případy úmrtí pacientů z nesprávného dávkování imunosupresiv na základě výsledků získaných imunologickými metodami. V současné době jsou imunotesty v klinických laboratořích nahrazovány metodami HPLC / MS / MS. Takže na klinice Mnichovské univerzity je denně analyzováno asi 70 vzorků pro obsah sirolimu a cyklosporinu A za použití systému HPLC / MS / MS. Veškerá příprava vzorků a kontrola zařízení provádí jeden zaměstnanec. Laboratoř také přepne na takrolimovou analýzu touto metodou.

    • Použití HPLC / MS / MS pro rutinní simultánní stanovení takrolimu, sirolimu, askomycinu, demethoxysirolimu, cyklosporinu A a cyklosporinu G v krvi je popsáno. Rozsah je určen koncentrací 1,0 - 80,0 ng / ml. Pro cyklosporin je 25 až 2000 ng / ml. V průběhu roku bylo v laboratoři analyzováno více než 50 000 vzorků.
    • Vzhledem k tomu, že bylo zjištěno, že současná aplikace takrolimu a sirolimu poskytuje pozitivní terapeutický účinek, byla vyvinuta jednoduchá a účinná metoda HPLC / MS / MS pro oddělené stanovení v krvi pro klinické analýzy. Analýza jednoho vzorku trvá 2,5 minut s přesností 2,46% -7,04% pro takrolimus a 5,22% -8,30% pro sirolimus pro celou analytickou křivku. Dolní limit stanovení takrolimu je 0,52 ng / ml, sirolimus - 0,47 ng / ml.

    V. Stanovení homocysteinu pomocí HPLC / MS / MS

    Homocystein je zájem o kardiovaskulárních chorob (tromboembolické nemoci, onemocnění srdce, ateroskleróza), a jiné klinické stavy (deprese, Alzheimerova choroba, osteoporóza, komplikace těhotenství, a další.). Stávající metody analýzy homocysteinu, včetně imunoanalýzy, jsou nákladné. Byla vyvinuta rychlá metoda HPLC / MS / MS pro analýzu homocysteinu pro rutinní klinické použití při analýze velkého počtu vzorků. Ionizace byla provedena elektrosprejem. Metoda je reprodukovatelná, vysoce specifická a přesná. Výhodou metody jsou také nízké náklady na činidla a jednoduchost přípravy vzorku. Za den je možné analyzovat 500 nebo více vzorků.

    Závěr

    Je třeba poznamenat, že i když se v současné době používají podstatně zlepšené způsoby imunologických, vzhledem k technickým omezením v zásadě tato metoda nikdy srovnatelný přesnost HPLC IUMI a specificitu k cílové látce, a to zejména v přítomnosti metabolitů. To vede nejen k nízké přesnosti metody ELISA a vysokému procentu falešně pozitivních a falešně negativních výsledků, ale také neumožňuje srovnání výsledků získaných v různých klinických jednotkách metodou ELISA. Použití HPLC-MS / MS odstraňuje tento nedostatek, umožňuje vysoce specifické, přesné a rychlou analýzu velkého počtu vzorků s vysokou spolehlivostí v přítomnosti metabolitů a bez rušení od doprovodných a endogenních látek v plazmě a krvi pacientů.

    Navzdory zjevně vysokým nákladům na přístrojový komplex, jak ukazuje světová praxe, při správném fungování se tento komplex za 1-2 roky vyplatí. Důvodem je především nízké náklady na jednu analýzu v důsledku současné analýzy desítek a stovek připojení a nedostatečné potřeby nákupu drahých diagnostických sestav. Kromě toho má laboratoř možnost samostatně vyvinout všechny potřebné analytické techniky a nezávisí na výrobci sestav.

    Volba správné konfigurace panelu přístrojů

    Existuje mnoho různých způsobů hmotnostní spektrometrie a typy hmotnostních spektrometrů určené pro řešení různých problémů - strukturální identifikace proteinového komplexu makromolekul hmotnosti ve stovkách tisíc Daltonů do běžné vysoce propustného kvantitativní analýzy malých molekul.

    Úspěšně řešit úkol, jedním z hlavních podmínek je výběr správného typu zařízení. Neexistuje žádné univerzální zařízení, které by umožnilo vyřešit celé spektrum analytických problémů. Takže nástroj určený k řešení problému identifikace mikroorganismů není schopen kvantitativní analýzy malých molekul. A naopak. Faktem je, že navzdory běžnému názvu jsou to naprosto odlišné přístroje, které fungují na různých fyzikálních principech. V prvním případě byl tento časový letový hmotnostní spektrometr s laserovým zdrojem ionizace - MALDI-TOF a ve druhém - trojitý kvadrupól s elektrosprejovou ionizací - HPLC-MSMS.

    Druhým nejdůležitějším parametrem je výběr správné konfigurace systému. Existuje několik významných výrobců zařízení pro hmotnostní spektrometr. Zařízení každého výrobce mají nejen své vlastní silné stránky, ale i slabiny, o kterých obvykle upřednostňují mlčení. Každý výrobce vyrábí vlastní řadu zařízení. Náklady na jeden analytický komplex jsou v rozmezí od 100 000 do 1 000 000 dolarů nebo více. Výběr optimálního výrobce a správná konfigurace zařízení nejenže ušetří značné finanční prostředky, ale také účinněji řeší úkol. Naneštěstí existuje mnoho příkladů, kdy bylo laboratorní vybavení provedeno bez zohlednění těchto faktorů. Výsledkem je nečinné vybavení, zbytečné peníze.

    Třetím faktorem určujícím úspěšné fungování laboratoře je personál. Hmotnostní spektrometry vyžadují vysoce kvalifikovaný personál. Bohužel v žádné univerzitě v Rusku neexistuje kurz moderní praktické hmotnostní spektrometrie, zvláště s ohledem na klinické aplikace, a úkoly školení pracovníků každé laboratoře musí být řešeny samostatně. Samozřejmě, 2-3 dny školení o školení vedené výrobcem po startu zařízení není absolutní dostatečné k pochopení základů metody a získání dovedností pracovat s tímto zařízením.

    Čtvrtým faktorem je nedostatek připravených analytických technik. Každá laboratoř má své vlastní priority, jejichž řešení je nezbytné pro rozvoj vlastních metod. To může provést osoba, která má alespoň 2 až 3 roky zkušeností se zařízením. Firmy-výrobci někdy dodávají jednu nebo dvě obecné metody doporučení charakter, ale ne přizpůsobit pro specifické úkoly laboratoře.

    V BioFarmExpert LLC pracovní specialisté s dlouholetými zkušenostmi na různých typech hmotnostních spektrometrů, stejně jako vývoj technik a stanovení vysoce výkonných analýz. Proto poskytujeme následující služby:

    1. Výběr optimální konfigurace zařízení pro konkrétní klientské úlohy.
    2. Nákup, dodávka a uvedení do provozu zařízení předních výrobců tandemových hmotnostních spektrometrů. Postupné školení personálu během jednoho roku od okamžiku zahájení provozu zařízení.
    3. Sada hotových technik a databází pro řešení základních klinických problémů.
    4. Vývoj analytických technik a řešení specifických úkolů klienta v jeho laboratoři za účasti jeho zaměstnanců.
    5. Metodická podpora ve všech fázích práce.

    Analýza krve s předběžnou derivatizací (deriváty TMS)

    Dvourozměrná plynová chromatografie - hmotnostní spektrometrie v čase letu pro analýzu krevní plazmy s předběžnou derivatizací (deriváty TMS) prokazující stanovení glukózy 5TMS

    Analýza metabolitů krevní plazmy pomocí dvojrozměrné plynové chromatografie - časové letu hmotnostní spektrometrie s předběžnou derivatizací (deriváty TMC) demonstruje detekci 5TCS glukózy o hodnotě 901 náhod.